1）作为体内生化反应中一碳单位转移酶系的辅酶，起着一碳单位传递体的作用。

2）参与嘌呤和胸腺嘧啶的合成，进一步合成DNA和RNA。

3）参与氨基酸代谢，在甘氨酸与丝氨酸、组氨酸和谷氨酸、同型半胱氨酸与蛋氨酸之间的相互转化过程中充当一碳单位的载体。

4）参与血红蛋白及甲基化合物如肾上腺素、胆碱、肌酸等的合成。

叶酸对蛋白质、核酸的合成及各种氨基酸的代谢有重要作用。

参与嘌呤和嘧啶合成:作为辅酶参与核酸合成中嘌呤和嘧啶的形成，在细胞DNA合成中发挥作用。

参与氨基酸相互转化:参与二碳氨基酸和三碳氨基酸相互转化。促进了苯丙氨酸与酪氨酸，组氨酸与谷氨酸，半胱氨酸与蛋氨酸的转化。此外，叶酸还是含铁血红蛋白的组分。